Knowledge · 03

サンプリング標準と SOP

呼気 VOC 測定において、pre-analytical の分散は全測定分散の 30〜50% を占めます。サンプリング手技の標準化は、再現性ある臨床エビデンス構築の最優先課題です。

1. サンプリング方式の分類

方式代表製品強み弱み用途
吸着捕集 (TD-tube)Owlstone ReCIVA / ReCIVA EvoCO2 モニタによる末梢気の選別, 冷蔵搬送可ランニングコスト (Tenax TA 等の吸着剤)GC-MS / FAIMS
ハンドヘルド捕集VolaTrap® (東海電子)片手・可搬, 呼気全体(whole breath)を一定量捕集, 吸着チューブへ直接固定, 電源/清浄空気 不要呼気全体を捕集する方式のため, CO₂ モニタによる終末呼気の選別は行わないGC-MS / TD-GC-MS(多施設・在宅)
バッグ収集Tedlar bag (1-3 L)低コスト・簡便材質由来 VOC, 保存限界 (〜6h)e-nose / SIFT-MS
直接サンプリングSpiroNose (Breathomix), GeNoseリアルタイム測定, 移送不要装置前での採取のみe-nose 現場運用
オンライン MSPTR-MS, SIFT-MS, SESI-MS時間分解・代謝動態追跡装置高価, 研究用途中心機構研究
冷却凝縮 (EBC)RTube, ECoScreen水溶性分子回収標準化が遅れているバイオマーカー探索
液体捕集・高濃縮AirOnics® (RS DYNAMICS Medical)液体ソルベントで捕集し最大10万倍に高濃縮, VOC+粒子を回収, CO₂で終末呼気選択, 加熱脱着 不要, 採取と分析を分離溶媒・液体管理, 装置構成が複雑/2026年7月発表・実売/価格情報 未公開GC-MS / LC-MS(超微量・ppt探索)
採取デバイスの一例:VolaTrap®(呼気サンプラー)
片手で扱える国産初のハンドヘルド型 呼気VOCサンプラー。呼気全体(whole breath)を一定量捕集して吸着チューブへ固定し、GC-MS/TD-GC-MS の標準ワークフローに直結します。採取者や施設が変わってもばらつきを抑えやすく、電源・清浄空気の供給が不要なため、多施設・在宅での採取にも向きます。 VolaTrap® 公式サイトを見る ↗ 開発:東海電子 ・ 発売中

2. 推奨プリアナリティカル SOP (抜粋)

2.1 被験者準備 (採取前)

  • 採取前 2時間は絶食、水以外の飲料は不可。
  • 採取前 30分は激しい運動・喫煙を避ける。
  • 採取前 10分間、測定室 (背景大気管理済) で安静座位。
  • 歯磨き・うがいは採取 60分前まで に済ませる (口腔 VOC 干渉の軽減)。

2.2 採取手技

  • ノーズクリップ装着、マウスピースから安静呼吸で5〜10呼吸分採取 (TD方式時)。
  • CO2 モニタ併用時は、CO2≥3.5% の呼気相を選択 (末梢気の目安)。
  • フォース息止め後の一気呼出は e-nose 方式で一般的 (GeNose: 3L 程度)。
  • 採取毎に 背景大気 (room air) も同条件で採取 し、差分解析に使う。

2.3 搬送・保存

  • TD-tube: 4°C で72時間以内 に測定、以降は −20°C 保存。
  • Tedlar bag: 採取後6時間以内 に測定 (Sulfides 損失が早い)。
  • ドライアイス輸送は避ける (容器変形と吸着剤ドリフトの原因)。

3. ペパーミント試験 (装置間ベンチマーク)

Peppermint Initiative (IABR 主導) が提唱する装置間クロスキャリブレーション法。被験者に標準化ペパーミントオイルを投与し、呼気中のメントン・リモネン・α-ピネン・β-ピネン等の 6 VOC のウォッシュアウト曲線 (採取: 60/165/285/405 分等) を測定、装置・プロトコル間の一貫性を評価します。 論文 (Henderson et al., J Breath Res 2020; 2022 update) に従って実施することで、論文の「再現性」を担保することが推奨されます。

自ラボで SOP を立ち上げる方へ
本サイト リソース / SOP で、TD-GC-MS 用・e-nose 用・EBC 用の SOP 雛形(Markdown / Word)を整備中です。公開の際は ニュース でお知らせします。解析設計とバイアス対策は 解析パイプラインとバイアス もあわせてご覧ください。

4. よくある落とし穴

  • Tedlar bag の空運転: 初回使用時は VOC 放出が強く、3回以上パージしてから使用する。
  • 配管材質: Tygon チューブは脱ガスが多い。PTFE が推奨。
  • 呼吸パターン未制御: 採取毎の呼吸量が違うと、肺胞気ピックアップ率が変動する。Capnography 併用を推奨。
  • 大気背景未測定: 室内の塗料由来 VOC (特にトルエン、ホルムアルデヒド) をバックグラウンドで差し引けないと疾患分類が壊れる。

参考文献 (主要)

  • Henderson et al. J Breath Res, 2020; 2022 — Peppermint Consensus.
  • Beauchamp et al. J Breath Res, 2013 — TD-tube サンプリングレビュー.
  • Pleil et al. J Breath Res, 2019 — Pre-analytical variability.
  • Boshier et al. Anal Chem, 2010 — Tedlar 保存時間依存性.